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液氮罐细胞冷冻

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  细胞冻存是细胞生存的重要要领之一。使用冻存技能将细胞置于-196~C液氮中低温生存,可以使细胞临时离开生长状态而将其细胞特性生存起来,如许在必要的时间再苏醒细胞用于实行。并且适度地生存肯定量的细胞,可以防备因正在造就的细胞被污染或其他不测变乱而使细胞丢种,起到了细胞保种的作用。除此之外,还可以使用细胞冻存的情势来购置、寄赠、互换和运送某些细胞。 细胞冻存时向造就基中参加掩护剂——终浓度5%~15%的甘油或二甲基亚砜(DMSO),可使溶液冰点低落,加之在迟钝冻结条件下,细胞内水分透出,淘汰了冰晶形成,从而制止细胞毁伤。尺度冷冻速率开始为-1 到 -2℃/min,当温度低于-25℃时可加快,到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。

  现在常用的掩护剂为二甲亚砜(DMSO)和甘油,它们对细胞无毒性,分子量小,溶解度大,易穿透细胞。

  实行质料

  仪器:液氮罐、冻存管(塑料螺口专用冻存管或安瓿瓶)、离心管、吸管、离心机等

  试剂:0.25%胰酶、造就基、含掩护剂的造就基(即冻存液)

  附:冻存液配制:造就基参加甘油或DSMO,使其终浓度达5-20%。掩护剂的种类和用量视差别细胞而差别。配好后4℃下生存。

  实行步调

  1.消化细胞,将细胞悬液网络至离心管中。

  2.1000rpm离心10分钟,弃上清液。

  3.沉淀加含掩护液的造就,计数,调解至5106/ml左右。

  4.将悬液分至冻存管中,每管1ml。

  5.将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口,封口肯定要严,不然苏醒时易出现爆裂。

  6.贴上标签,写明细胞种类,冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。

  7.按下列次序降温:室温→4℃(20分钟)→冰箱冷冻室(30分钟)→低温冰箱(-30℃ 1小时)→气态氮(30分钟)→液氮。

  细致:操纵时应警惕,以免液氮冻伤。液氮定期查抄,随时增补,绝对不克不及挥发洁净,一样通常30立升的液氮能用1~1.5月。


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